ⅠNнуклеиновая кіслатаiувядзенне
Нуклеінавая кіслата падзяляецца на дэзаксірыбануклеінавую кіслату (ДНК) і рыбануклеінавую кіслату (РНК), сярод якіх РНК падзяляецца на рыбасомную РНК (рРНК), інфармацыйную РНК (мРНК) і пераносную РНК (тРНК) у адпаведнасці з яе рознымі функцыямі.ДНК у асноўным сканцэнтравана ў ядры, мітахондрыях і хлараформе, а РНК у асноўным размяркоўваецца ў цытаплазме.З'яўляючыся матэрыяльнай асновай экспрэсіі генаў, экстракцыя нуклеінавых кіслот гуляе надзвычай важную ролю ў малекулярна-біялагічных даследаваннях і клінічнай малекулярнай дыягностыцы.Канцэнтрацыя і чысціня экстракцыі нуклеінавых кіслот будзе непасрэдна ўплываць на наступную ПЦР, секвенирование, канструяванне вектара, расшчапленне ферментаў і іншыя эксперыменты.
Ⅱ Метад экстракцыі і ачысткі нуклеінавых кіслот
① Метад экстракцыі фенолам/хлараформам
Экстракцыя фенолам/хлараформам - гэта класічны метад экстракцыі ДНК, які ў асноўным выкарыстоўвае два розныя арганічныя растваральнікі для апрацоўкі ўзораў, растварэнне нуклеінавай кіслаты на аснове ДНК у воднай фазе, ліпідаў у арганічнай фазе і бялкоў паміж дзвюма фазамі.Гэты метад мае такія перавагі, як нізкі кошт, высокая чысціня і добры эфект.Недахопы - складаная эксплуатацыя і працяглы час.
② Метад тризола
Метад Тризол - гэта класічны метад экстракцыі РНК.Метад Trizol падзяляецца на водную фазу і арганічную фазу пасля цэнтрыфугавання з хлараформам, у якой РНК раствараюць у воднай фазе, водную фазу пераносяць у новую прабірку EP, асадак атрымліваюць пасля дадання ізапрапанолу, а затым ачысткі этанолам.Гэты метад падыходзіць для экстракцыі РНК з тканак, клетак і бактэрый жывёл.
③ метад ачысткі цэнтрабежнай калонкі
Метад ачысткі ў цэнтрыфужнай калонцы можа адсарбаваць ДНК спецыяльна праз спецыяльныя адсорбцыйныя матэрыялы крэмніевай матрыцы, у той час як РНК і бялок могуць праходзіць гладка, а затым выкарыстоўваць высокі ўзровень солі і нізкі рн для аб'яднання нуклеінавай кіслаты, элюцыю з нізкім утрыманнем солі і высокім значэннем рн для аддзялення і ачысткі нуклеінавай кіслаты.Перавагамі з'яўляюцца высокая канцэнтрацыя ачысткі, высокая стабільнасць, адсутнасць неабходнасці ў арганічным растваральніку і нізкі кошт.Недахопам з'яўляецца тое, што яго трэба цэнтрыфугаваць крок за крокам, больш этапаў аперацыі.
④ Метад магнітных шарыкаў
Метад магнітных шарыкаў заключаецца ў расшчапленні ўзору клетачнай тканіны праз лізат, вызваленні нуклеінавай кіслаты ва ўзоры, пасля чаго малекулы нуклеінавых кіслот спецыяльна адсарбуюцца на паверхні магнітнага шарыка, у той час як прымешкі, такія як бялкі і цукру, застаюцца ў вадкасць.Праз этапы расшчаплення клеткавай тканіны, звязвання магнітных шарыкаў з нуклеінавай кіслатой, прамывання нуклеінавых кіслот, элюіравання нуклеінавых кіслот і г.д. канчаткова атрымліваецца чыстая нуклеінавая кіслата.Перавагамі з'яўляюцца простая эксплуатацыя і кароткі час выкарыстання, без неабходнасці этапнага цэнтрыфугавання.Ён мае нізкія тэхнічныя патрабаванні і можа рэалізаваць аўтаматычную і масавую працу.Спецыфічнае спалучэнне магнітнага шарыка і нуклеінавай кіслаты робіць вынятую нуклеінавую кіслату высокай канцэнтрацыі і чысціні.Недахопам з'яўляецца тое, што цяперашняя рынкавая цана адносна дарагая.
⑤ Іншыя метады
У дадатак да вышэйпералічаных чатырох метадаў, існуюць кіпячы крэкінг, метад канцэнтраванай солі, аніённы метад мыйнага сродкі, ультрагукавы метад і ферментатыўны метад і г.д.
Ⅲ Тып экстракцыі нуклеінавых кіслот
Foregene мае вядучую ў свеце платформу прамой ПЦР, платформу ізаляцыі РНК у двух слупках (толькі ДНК + толькі РНК).Асноўная прадукцыя ўключае наборы для вылучэння ДНК / РНК, рэагенты для ПЦР і прамой ПЦР, серыі малекулярных лабараторных рэагентаў.
① Агульная экстракцыя РНК
Узоры агульнай экстракцыі РНК ўключаюць кроў, клеткі, тканкі жывёл, расліны, вірусы і г. д. Высокая чысціня і высокая канцэнтрацыя агульнай РНК могуць быць атрыманы шляхам экстракцыі агульнай РНК, якую можна выкарыстоўваць у RT-PCR, аналізе чыпаў, трансляцыі in vitro, малекулярнае кланаванне, Dot Blot і іншыя эксперыменты.
Foregene звязанаНаборы для выдзялення РНК
Набор для вылучэння агульнай РНК жывёл--Хутка і эфектыўна здабываць агульную РНК высокай чысціні і высокай якасці з розных тканак жывёл.
Набор для вылучэння агульнай РНК клетак--Высокаачышчаную і якасную сумарную РНК можна атрымаць з розных культывуюцца клетак за 11 хвілін.
Набор для вылучэння агульнай РНК раслін--Хутка здабывайце высакаякасную сумарную РНК з узораў раслін з нізкім утрыманнем поліцукрыдаў і поліфенолаў.
Набор для выдзялення віруснай РНК--Хутка ізалюйце і ачышчайце вірусную РНК з такіх узораў, як плазма, сыроватка, бясклетачныя вадкасці арганізма і супернатанты клетачнай культуры.
② Вылучэнне геномнай ДНК
Узоры экстракцыі геномнай ДНК ўключаюць глебу, фекаліі, кроў, клеткі, тканіны жывёл, расліны, вірусы і г. д. Экстракцыя геномнай ДНК можа быць выкарыстана для расшчаплення ферментаў, стварэння бібліятэкі ДНК, ПЦР, падрыхтоўкі антыцелаў, аналізу гібрыдызацыі Вестэрн-блот, геннага чыпа, высокіх -прапускная здольнасць паслядоўнасці і іншыя эксперыменты.
Foregene звязанаНаборы для вылучэння ДНК
Набор для вылучэння ДНК з тканак жывёл--Хуткая экстракцыя і ачыстка геномнай ДНК з розных крыніц, такіх як тканкі жывёл, клеткі і г.д.
Міді-набор ДНК крыві (1-5 мл)--Хутка ачысціце высакаякасную геномную ДНК з антыкаагулянтнай крыві (1-5 мл).
Камплект для вылучэння ДНК з буккальнага мазка/карты FTA-- Хутка ачысціце высакаякасную геномную ДНК з узораў буккального мазка/карткі FTA.
Набор для выдзялення ДНК раслін--Хуткая ачыстка і атрыманне высакаякаснай геномнай ДНК з узораў раслін (уключаючы ўзоры поліцукрыдаў і поліфенолаў)
③ Экстракцыя плазміды
Плазміда ўяўляе сабой разнавіднасць кальцавой малой малекулы ДНК у клетках, якая з'яўляецца агульным носьбітам рэкамбінацыі ДНК.Метад экстракцыі плазміды заключаецца ў выдаленні РНК, аддзяленні плазміды ад геномнай ДНК бактэрый і выдаленні бялку і іншых прымешак для атрымання адносна чыстай плазміды.
Міні-набор General Plasmid-- Хутка ачысціце высакаякасную плазмідную ДНК з трансфармаваных бактэрый для звычайных малекулярна-біялагічных эксперыментаў, такіх як трансфармацыя і расшчапленне ферментамі
④ Іншыя тыпы экстракцыі, экстракцыя мікраРНК і г.д.
Набор для ізаляцыі мікраРНК жывёл-- Хутка і эфектыўна здабывайце невялікія фрагменты РНК 20-200 нт мікраРНК, міРНК, мРНК з розных тканак і клетак жывёл
Ⅳ Патрабаванні да экстракцыі нуклеінавых кіслот і выніку ачысткіs
① Каб забяспечыць цэласнасць першаснай структуры нуклеінавай кіслаты.
② Паменшыць умяшанне бялкоў, цукроў, ліпідаў і іншых макрамалекул
③ У пробах нуклеінавых кіслот не павінна быць арганічных растваральнікаў або высокай канцэнтрацыі іёнаў металаў, якія могуць інгібіраваць фермент.
④ РНК і іншыя забруджвання нуклеінавых кіслот павінны быць ліквідаваны пры экстракцыі ДНК, і наадварот.
Час публікацыі: 24 лістапада 2022 г
